氣相色譜定量分析原理

氣相色譜法是一種分離分析方法。操作時(shí)使用氣相色譜儀，被分析樣品（氣體或液體汽化后的蒸汽）在流速保持一定的惰性氣體（成為載氣或流動(dòng)相）的帶動(dòng)下進(jìn)入填充有固定相的色譜柱，在色譜柱中樣品被分離成一個(gè)個(gè)的單一組分，并以一定的先后次序從色譜柱流出，進(jìn)入檢測(cè)器，轉(zhuǎn)變成電信號(hào)，再經(jīng)放大后，由記錄器記錄下來(lái)，在記錄紙上得到一組曲線圖（稱(chēng)為色譜圖），根據(jù)色譜峰的峰高或峰面積就可以定量測(cè)定樣品中各個(gè)組分的含量。

氣相色譜的定量檢測(cè)方法一般有歸一化法、內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)三種方法，其各有優(yōu)缺點(diǎn)。歸一化法是將有機(jī)樣品中所有組分的含量之和定位100%，計(jì)算出其中某一組分含量的百分?jǐn)?shù)，其方便簡(jiǎn)單，樣品進(jìn)樣量和流動(dòng)相載氣流速等對(duì)計(jì)算結(jié)果影響不大，但要求每個(gè)組分色譜峰面積能準(zhǔn)確地計(jì)算，因此僅適合組分少的有機(jī)樣品。內(nèi)標(biāo)法是向有機(jī)樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)已知含量的純有機(jī)物（可以和樣品中組分相同，也可以不同）進(jìn)行氣相色譜測(cè)定，然后利用欲測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物的色譜峰面積和定量校正因子進(jìn)行定量分析，其避免了歸一化方法的缺點(diǎn)，但需要標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)稱(chēng)取有機(jī)樣品和內(nèi)標(biāo)物的重量，而且選用的內(nèi)標(biāo)物的選取要求較高。

外標(biāo)法[14]是在進(jìn)樣量、色譜儀器及操作等分析條件嚴(yán)格固定不變的前提下，先使用不同含量的組分純物質(zhì)等量進(jìn)樣進(jìn)行色譜分析，求出純物質(zhì)含量和色譜峰面積的關(guān)系，并繪出相應(yīng)的定量校正曲線或給出線性方程式。然后將有機(jī)樣品在相同條件下進(jìn)行色譜分析，并根據(jù)定量校正曲線或線性方程式，計(jì)算出所需組分的定量分析結(jié)果。外標(biāo)法比較簡(jiǎn)便，尤其適合相同樣品的大批量測(cè)試，這對(duì)工業(yè)化生產(chǎn)或環(huán)境中某種有機(jī)物的檢測(cè)或控制非常有效。但這一方法對(duì)液體或揮發(fā)性不好的有機(jī)物組分定量分析時(shí)，往往誤差較大。

從分析原理上講，液相色譜法和經(jīng)典液相色譜（層析）沒(méi)有本質(zhì)的差別，但由于它采用了新型高壓輸液泵、高靈敏度檢測(cè)器和微粒固定相，因而在操作和條件等方面已*不同。液相色譜法特點(diǎn)：⑴由于新型微粒固定相填料的使用，分離能力高；⑵由于液相色譜柱具有，并且流動(dòng)相可以控制和改善分離過(guò)程的選擇性，選擇性高；⑶檢測(cè)靈敏度高；⑷由于高壓輸液泵的使用，相對(duì)經(jīng)典液相色譜，分析速度快。另外，液相色譜適用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)、受熱不穩(wěn)定、分子量大和不同極性的有機(jī)物，尤其是生物活性物質(zhì)的天然產(chǎn)物和高分子化合物等。其缺點(diǎn)有：⑴使用多種溶劑作為流動(dòng)相，分析成本高于氣相色譜法，且易引起環(huán)境污染，程序升溫操作復(fù)雜；⑵缺少如氣相色譜法中使用的通用性檢測(cè)器；⑶不適用于在高壓下易分解和變性的具有生物活性的生化樣品。

液相色譜的定性和定量分析原理和方法與氣相色譜基本相同。