液相色譜法在中藥分析中的應(yīng)用

真?zhèn)舞b別

        對于中藥的鑒別目前使用的方法較多，每種方法都有其特點和操作方法，鑒別方法也有針對的中藥和范圍，在操作起來會顯得過程繁瑣。中藥指紋圖譜可以全面的反應(yīng)中藥中化學(xué)成分和特征。而到中藥的真?zhèn)挝粗獣r可以通過中藥指紋圖譜進行鑒別和區(qū)分。

非法染色

非法染色是近年來曝光較多的中藥摻偽行為，染色中藥以次充好，不僅影響了中藥臨床療效，而且對患者健康帶來潛在危害。色素可分為天然色素和人工合成色素，部分合成色素具有致敏性和癌誘變性。因此中藥染色已嚴(yán)重影響中藥安全，需要加強監(jiān)管和執(zhí)法。

目前國家頒布的一系列藥品檢驗補充檢驗方法主要針對10 余種單味藥材采用薄層色譜法( TLC) 和高效液相法( HPLC) 檢測1 ～ 5種色素。繼國家相關(guān)檢驗標(biāo)準(zhǔn)公布后，中藥染色出現(xiàn)了新的變化，具有規(guī)避標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定色素品種、多種色素配色染色等趨勢。

越來越多的研究者采用薄層、高效液相色譜、液相三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜、UHPLC-QTOF 建立了中藥中多達數(shù)十種常見染色色素系列定性、定量檢測方法，依色素性質(zhì)，分別采用溶劑提取、固相萃取等前處理方法，采用UPLC-QTOF等方法 進行測定。建立的方法覆蓋色素品種多，適用于多種中藥品種，具備高通量、準(zhǔn)確等特點，為中藥染色檢測提供了急需的參考方法。

非法添加

糖皮質(zhì)激素是由腎上腺皮質(zhì)最中層束狀帶分泌的一種代謝調(diào)節(jié)激素，具有調(diào)節(jié)糖、脂肪和蛋白質(zhì)的生物合成和代謝的作用，臨床上應(yīng)用于內(nèi)分泌代謝病、感染性疾病、血液病、心血管疾病、風(fēng)濕免疫病、呼吸疾病等的治療。但不適當(dāng)?shù)氖褂每蓪?dǎo)致多種不良反應(yīng)，引起代謝紊亂。一些中藥制劑中非法添加糖皮質(zhì)激素，使患者短期內(nèi)病情得到改善，但會對健康造成嚴(yán)重威脅。

目前，檢測藥品和保健品中糖皮質(zhì)激素的方法主要有TLC 法、HPLC 法、LC-MS /MS 法、UPLC-MS /MS 法或幾種方法的聯(lián)用，檢測的添加劑種類都在20 種左右。

過程控制

隨著中藥在國際上的廣泛應(yīng)用，其有效性、安全性和制藥工藝過程質(zhì)量穩(wěn)定性等問題引起了專家學(xué)者的廣泛關(guān)注。中藥質(zhì)量控制一直是中藥研究與生產(chǎn)的難點和熱點，也是實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的重要基礎(chǔ)和關(guān)鍵。中藥指紋圖譜是指中藥經(jīng)適當(dāng)處理后，采用現(xiàn)代科學(xué)分析手段，得到的能夠標(biāo)示該中藥化學(xué)特性的共有圖形( 圖像) 的圖譜。近年來，中藥指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制方面得到了廣泛應(yīng)用，成為一種能為國內(nèi)外廣泛接受的中藥質(zhì)量評價模式，符合中藥多數(shù)以復(fù)方和多成分給藥的特點，能較好地評價中藥及其制藥過程的真實性、穩(wěn)定性和一致性。

現(xiàn)有以單一的化學(xué)成分變化來控制中藥制藥的過程，難以體現(xiàn)中藥制藥過程中化學(xué)成分的整體變化，也很難保證中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的穩(wěn)定傳遞。采用多指標(biāo)成分含量測定和色譜指紋圖譜技術(shù)的控制模式，可對中藥制藥過程進行精確的全程控制，有效保證中藥的有效性和穩(wěn)定性，將成為中藥質(zhì)控的重要手段，具有良好的應(yīng)用前景。

質(zhì)量控制

中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的不完善是阻礙中藥產(chǎn)業(yè)走向現(xiàn)代化與國際化的障礙。中藥質(zhì)量控制模式研究從最初依靠簡單的外觀性狀觀察和顯微鑒別，到具有專屬性薄層定性鑒別和內(nèi)在成分的定量檢測方向發(fā)展。

研究者早期將薄層色譜引入中藥鑒定，因其具有快速、簡便等優(yōu)點而被廣泛使用。高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)、質(zhì)譜(MS)等方法及各種方法的聯(lián)用也被廣泛應(yīng)用于中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。指紋圖譜與有效成分定量測定的結(jié)合、指紋圖譜與藥效關(guān)系的研究也推動了中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的發(fā)展。在定量指標(biāo)方面，由測定單一成分向測定多種成分發(fā)展。目前，劉昌孝院士提出了質(zhì)量標(biāo)志物的概念，為中藥質(zhì)量控制的研究提出了新要求。液相色譜法在中藥的質(zhì)量控制中已經(jīng)被廣泛使用，具有操作簡單、快速、高效、高靈敏度的特點，并且對于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、相對分子質(zhì)量大的高分子化合物以及離子型化合物尤為適合。

研究進展

在線二維液相色譜技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用進展

中藥化學(xué)成分是中藥藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，但往往一味中藥就囊括了從極性到非極性、從小分子到大分子的多種化合物，其組成極為復(fù)雜。因此，對中藥化學(xué)成分進行全面、快速地表征一直是中藥分析研究的熱點與難點，也是研究和闡明中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的先決條件。在現(xiàn)代中藥研究中，色譜技術(shù)尤其是液相色譜(LC)作為常用的分離、分析手段扮演著不可替代的角色。多維液相色譜的建立和運用也為中藥物質(zhì)基礎(chǔ)表征和活性成分篩選提供了新技術(shù)。

在線二維液相色譜因峰容量高、分離效率好而受到眾多研究者的青睞。近年來，在線二維液相色譜被廣泛地應(yīng)用于多個研究領(lǐng)域中復(fù)雜樣品的分析。在線二維液相法在中藥中的應(yīng)用顯著地提高了中藥化學(xué)成分分析和識別的效率，為后續(xù)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機制和質(zhì)量評價研究奠定了良好基礎(chǔ)。

超高效液相色譜法在中藥分析中的應(yīng)用

近年來，隨著超高效液相色譜 的興起，及其與指紋圖譜技術(shù)的迅速融合， 超高效液相色譜指紋圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量評價中顯示出*的優(yōu)勢。有研究對比了土茯苓藥材的UHPLC和HPLC指紋圖譜， 發(fā)現(xiàn)UHPLC在10 min 內(nèi)完成的譜峰，HPLC需要75 min才能完成， 說明UPLC的分析效率更高，可顯著縮短分析時間，減少流動相的消耗;UHPLC可檢測更微量的樣品，進樣量為1∶20 時，色譜峰高基本一致， 說明UHPLC的色譜分離效果更好、靈敏度更高;UHPLC的洗脫條件比HPLC的變化更簡單，色譜峰的漂移時間較短，在指紋圖譜軟件中色譜峰易于匹配。相關(guān)質(zhì)控技術(shù)已成功應(yīng)用于復(fù)方丹參滴丸，并被2010 年版《中國藥典》收載。